頭皮脂漏性皮膚炎（SD）は、マラセチア種の増殖に関連する慢性タイプの炎症性皮膚炎です。さまざまな集団を対象とした最近のいくつかの頭皮マイクロバイオーム研究でも、フケと細菌および真菌の腸内細菌叢異常との関連性が明らかになりました。クチバクテリウム・アクネス（以前はプロピオニバクテリウム・アクネスとして知られていた）と表皮ブドウ球菌が頭皮の上部の核となる細菌種であることが注目されています。
Background
頭皮脂漏性皮膚炎（SD）は、皮脂の不均衡と皮脂の増殖に関連する慢性炎症性皮膚炎です。 Malassezia 種。スカルプSDにはさまざまな抗真菌シャンプーが一般的に使用されています。
Aims
グリチルレチン酸には、抗酸化作用、抗炎症作用、抗アレルギー作用があることが知られています。この研究は、頭皮SDの治療におけるグリチルレチン酸を含む新処方シャンプーの有効性を評価するために設計されました。
Patients/Methods
34 人の患者が登録され、6% グリチルレチン酸複合シャンプーで治療されました。有効性は、ベースライン、2週目、5週目に同じ皮膚科医によってDermatology Life Quality Index（DLQI）と付着性頭皮フレーキングスコア（ASFS）を用いて臨床的に評価されました。最も顕著な臨床的改善がみられた24人の被験者のうち、ベースラインと1週目に頭皮サンプルに含まれる4種類の一般的な微生物が定量的ポリメラーゼ連鎖反応（qPCR）によって分析されました。
Results
2 週目と 5 週目の DLQI と ASFS は、ベースラインと比較して大幅に改善しました。細菌プロファイルでは、 アクネ菌 そして減少 表皮ブドウ球菌 5 週目で、真菌プロファイルは両方の菌の大幅な減少を示しました。 マラセチア制限菌 and マラセチア・グロボーサ。の比率 C. acne to S. epidermidis ベースラインの 0.93 から 5 週目の 1.55 まで大幅に増加しました。 M. restricta to M. globosa ベースラインの 5.02 から 5 週目の 1.00 に減少しました。 Conclusions
この新しいレジメンの有効性は、臨床レベルおよび微生物レベルで客観的に実証されました。この新しい処方は、頭皮 SD における細菌および真菌の腸内細菌叢異常を軽減する可能性があります。
頭皮脂漏性皮膚炎（SD）は、頭皮脂漏性皮膚炎の増殖を伴う慢性タイプの炎症性皮膚炎です。 Malassezia species.1, 2 さまざまな集団を対象とした最近のいくつかの頭皮マイクロバイオーム研究でも、フケと細菌および真菌の腸内細菌叢異常との関連性が明らかになりました。3 アクネ菌 (以前はとして知られていました) プロピオニバクテリウム・アクネス） そして 表皮ブドウ球菌 頭皮の上部の核となる細菌種であることが注目されました。前者はより健康な頭皮と関連し、後者はフケのある頭皮と関連していました。2 共通のものと一緒に、 Malassezia 種 （M. restricta and M. globosa) 頭皮上、フケと他のフケとの関連性が高い Malassezia 種はマイコバイオームでも観察されました。2, 4
に対する抗真菌療法 Malassezia 種と抗炎症剤は頭皮の SD に役立ちます。伝統的に、ケトコナゾール、シクロピロックス オラミン、亜鉛ピリチオン、硫化セレン シャンプーがこの症状の一般的な治療法です。5 ただし、治療反応率は 26% ～ 77% とばらつきがありました。6 これらの従来のシャンプーに対する反応が不十分な患者には、異なる化合物を含む新しいシャンプーが依然として必要とされています。
グリチルレチン酸、甘草の根からのグリチルリチンの主な代謝産物であり、抗酸化作用、抗炎症作用、抗アレルギー作用、抗菌作用があることが知られています。かゆみ、アトピー性皮膚炎、尋常性座瘡、皮膚の老化、色素沈着過剰など、さまざまな皮膚症状に使用できます。7 頭皮 SD への応用は文献ではほとんど見つかりませんでした。8 この非盲検パイロット研究は、グリチルレチン酸を含む新処方シャンプーの臨床効果を評価することを目的としています。頭皮で一般的に見られる微生物を分析して、頭皮 SD 患者における腸内細菌叢の修復の可能性を調べました。
2020年6月から2021年2月まで頭皮SDのためにEn Chu Kong病院を訪れた20歳から65歳の患者は、皮膚科ライフクオリティインデックス（DLQI）が2以上、付着性頭皮フレーキングスコア（ASFS）が10以上という包含基準でこの研究に登録された。9–11 この非侵襲的研究の目的はすべての患者に公開されており、インフォームドコンセントフォームに署名されました (IRB No. ECKIRB1090405)。メントールにアレルギーがある患者、前月に頭皮手術を受けた患者、妊娠または授乳の予定がある患者、自己免疫疾患、がん、腎臓疾患、肝臓疾患のある患者、またはその他の主要な全身疾患のある患者は研究から除外された。合計 34 人の患者が対象基準を満たしました。学習アルゴリズムを図に示します。 1.
図 1: アルゴリズムを勉強します。 SD、脂漏性皮膚炎。 DLQI、皮膚科ライフクオリティインデックス。 ASFS、付着性頭皮剥離スコア; qPCR、定量的ポリメラーゼ連鎖反応
チルグリレチン酸複合体6％配合の新処方シャンプー（5αジュニパーメディプロ、マクロハイ株式会社）の成分は表のとおりです。 1。すべての患者は、最初に割り当てられたシャンプーで 10～20 秒間頭皮をすすぎ、マッサージし、水で洗い流し、続いて同じ製品で 1～2 分間 2 回目のマッサージをし、5 週間毎日洗い流すように指示されました。研究期間中は、他の頭皮疾患用の薬剤や外用剤の使用は認められなかった。
研究事例の 1 つ: 脂漏性皮膚炎が終わった 10年
女性／42歳
2人の子供を持つ主婦
メディプロ施術前の写真
4 つの一般的な微生物、すなわち、 C. acnes, 表皮ブドウ球菌, M. リストリクタ、 そして M.グロボーサを頭皮からサンプリングし、ベースラインと5週目に定量的ポリメラーゼ連鎖反応（qPCR）によって分析した。患者には、サンプリング手順の前日に髪を洗わないように依頼した。頭皮サンプリング中は、室温 25 ± 2°C、相対湿度 50% ± 10% の制御された環境が提供されました。サンプルは、頭頂領域と耳の上の側頭領域から 3 回採取されました。サンプリングは、以前の研究で説明されているように、綿棒法によって実行されました。12
Presto™ Mini gDNA Bacteria Kit (GBB100、Geneaid) を、サンプルの調製に関する製造業者の指示に従って使用しました。滅菌綿棒（LIBO Medical Products Inc.、カタログ番号 30071）を、サンプリング前に SCF-1 溶液（pH 7.6 トリス緩衝液 50 mM、pH 8.0 EDTA 1 mM、および 0.5% Tween 20）に浸漬しました。コームを使用して毛髪繊維を分離し、あらかじめ湿らせた綿棒を頭皮表面で約 30 回前後にこすりました。被覆面積の合計は約 5 cm でした2 （長さ 10 cm、幅 0.5 cm）。サンプリング後、各綿棒の先端をハンドルから切り取り、1.5 mL SCF-1 溶液が入ったチューブに入れました。すべてのサンプルは、DNA 抽出まで -20°C で保存されました。
最も顕著な臨床的改善がみられた 24 人の被験者のうち、DNeasy を使用して綿棒サンプルからゲノム DNA が抽出されました。® Blood & Tissue Kit (Qiagen、カタログ番号 69504) は製造元の指示に従ってください。真菌のゲノム DNA を抽出するために手順がわずかに変更されました。
スワブサンプルを最大速度で 30 秒間ボルテックス混合し、その後スワブヘッドを取り外しました。 2 つの同一の 1.5 mL 懸濁液を複製の収集チューブから生成しました。 1 つは細菌 DNA 用で、もう 1 つは真菌 DNA 抽出用でした。各チューブからの懸濁液を 20,000 x で遠心分離してペレット化しました。 g (14,000 rpm) 3～5 分間。
細菌 DNA 抽出については、グラム陽性細菌からのゲノム DNA 単離に関する製造業者のプロトコールに従いました。真菌 DNA 抽出には、わずかに変更を加えたプロトコールを使用しました。ペレットを 150μL の溶解バッファー (200 mM Tris-HCl、pH 8.0; 25 mM EDTA、250 mM NaCl、および 0.5% SDS) に 100°C で 15 分間再懸濁しました。その後、180μLの緩衝液ATLを添加し、20μLのプロテイナーゼKとともに56℃で15分間インキュベートした。残りのステップはメーカーのプロトコルに従って実行され、サンプルは 150 μL AE バッファーで溶出されました。抽出した DNA は、リアルタイム PCR 定量前に -20°C で保存しました。
一般的な 4 種、つまり、 C. 座瘡, 表皮ブドウ球菌, M. リストリクタ、 そして M.グロボーサ、頭皮から収集され、TaqMan プローブと表にリストされている特定のプライマーを使用してリアルタイム PCR で定量されました。 2。リアルタイム定量的 PCR は、光学 96 ウェル プレートを使用した StepOnePlus™ System (Applied Biosystems) によって実行されました。反応ミックスの総量は 15 μL で、1 × KAPA PROBE FAST qPCR Master Mix (Kapa Biosystems)、250 nM フォワードおよびリバース プライマー、300 nM プローブ、および 5 μL サンプルで構成されていました。反応条件は、95℃で3分間、95℃で3秒間、60℃で1分間を40サイクルでした。各サンプルを 3 回繰り返して実行しました。各サンプルのコピー数は、次のように標準曲線から計算されました。
| Species | Primer | シーケンス (5’–3′) |
|---|---|---|
| アクネ菌 | PA-F | GCGTGAGTGACGGTAATGGGTA |
| PA-R | TTCCGACGCGATCAACC | |
| 表皮ブドウ球菌 | SepV58 | GCTGTGATGGGGAGAGGAAAT |
| SepR54bSta59bT | CGGTACGGGCACCTGTTATC | |
| マラセチア制限菌 | qMA-F | GTGAATTGCAGAATTCCGTGAAT |
| qMR-R | GCGAGCCTGTGCTAGGTA | |
| マラセチア・グロボーサ | qMA-F | GTGAATTGCAGAATTCCGTGAAT |
| qMG-R | GAGCTTTTTCTAGAGAAGAAAAG |
のゲノム DNA C. 座瘡 (ATCC 29399)、 表皮ブドウ球菌 (ATCC 14990)、 M. リストリクタ (ATCC MYA-4611)、および M.グロボーサ (ATCC 96807) は前述のように抽出されました。プライマーとプローブによって検出される標的フラグメントを表に示します。 2 新しいプライマーセットを使用して増幅されました。 Primer3web (http://primer3.ut.ee/) を表に示します。 3。増幅産物を GenepHlow™ Gel/PCR Kit (Geneaid、カタログ番号 DFH100) で精製し、pGEM にクローニングしました。®-T Easy Vector (Promega、カタログ番号 A1360)、その後の DH5α コンピテントへの形質転換 大腸菌 細胞。 High-Speed Plasmid Mini Kit (Geneaid、カタログ番号 PD300) を使用してプラスミドを抽出し、Nanodrop 1000 分光光度計 (Thermo Fisher Scientific Instrument Co. Ltd) で生成物の濃度を測定しました。標準曲線は、4 つのプラスミドの 10 倍希釈を個別に使用して作成されました。 ddHで段階希釈したプラスミド2０から１０１から１０６コピー／ｍｌの範囲の最終濃度をリアルタイムＰＣＲに使用した。リアルタイム PCR 反応ごとに新しい標準曲線を実行しました。
| Species | Primer | シーケンス (5’–3′) |
|---|---|---|
| アクネ菌 | CA-F | GCGTGAGTGACGGTAATGGGTA |
| CA-R | TTCCGACGCGATCAACC | |
| CA-TAQ | AGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCG | |
| 表皮ブドウ球菌 | SE-F | GCTGTGATGGGGAGAGGAAAT |
| SE-R | CGGTACGGGCACCTGTTATC | |
| SE-TAQ | AGAGGCTTTTCTCGGCAGTGTGAAATCAACGA | |
| マラセチア制限菌 | MR-F | GTGAATTGCAGAATTCCGTGAAT |
| MR-R | GCGAGCCTGTGCTAGGTA | |
| MR-TAQ | CTTTGAACGCACCTTGCGCTC | |
| マラセチア・グロボーサ | MG-F | GTGAATTGCAGAATTCCGTGAAT |
| MG-R | GAGCTTTTTCTAGAGAAGAAAAG | |
| MG-TAQ | CTTTGAACGCACCTTGCGCTC |
治療段階中の DLQI および ASFS スコアの治療効果分析は、それぞれシェフェ テストによる 2 週目および 5 週目の平均 ± 標準偏差 (SD) とベースラインとの比較によって実行されました。ベースラインと 5 週目での 4 つの微生物の対数コピー数を、ペアのサンプルによって比較しました。 t-テスト。分析には SPSS ソフトウェア 26.0 を使用しました。すべての統計検定は、有意水準 0.05 に設定されました。
男性12名、女性22名、合計34名の患者が臨床研究を完了した。ベースラインおよび治療後の臨床重症度スコア DLQI および ASFS を表に示します。 4 and 5。 DLQI と ASFS は、それぞれ 2 週目と 5 週目のベースラインと比較して大幅に改善しました (p < 0.05）。ただし、2 週目と 5 週目の間の DLQI と ASFS の変化は有意ではありませんでした (p = 0.652).
研究事例の 1 つ: 脂漏性皮膚炎が終わった 10年
女性／42歳
2人の子供を持つ主婦
MediPRO 治療 28 日後の写真
| 臨床パラメータ | DLQI (平均値 ± SD) |
|---|---|
| 0週目 | 12.7 ± 5.2 |
| 2週目 | 6.5 ± 5.7* |
| 第5週 | 5.3 ± 5.9** |
| W2 対 W0 の変化率 | −53.8 |
| W5 対 W0 の変化率 | −54.3 |
| 臨床パラメータ | ASFS (平均±SD) |
|---|---|
| 0週目 | 23.1 ± 8.9 |
| 2週目 | 10.4 ± 10.7* |
| 第5週 | 9.1 ± 13.0** |
| W2 対 W0 の変化率 | −56.9 |
| W5 対 W0 の変化率 | −65.8 |
最も顕著な臨床的改善がみられた 24 人の被験者のうち、5 週間のグリチルレチン酸シャンプー治療後に、頭皮上の 4 つの一般的な微生物の量に大きな変化が見られました (図 2）。細菌プロファイルでは、 C. acnes (p < 0.05）および大幅な減少 S. epidermidis (p < 0.001)、それぞれ (図 2A）。逆に、真菌プロファイルでは、両方の菌類の大幅な減少が示されました。 M. restricta (p < 0.001）および M.グロボーサ (p < 0.001) (図 2B).
の比率の変化をさらに分析しました。 C. acne to S. epidermidis との比率 M. を M に制限する. globosa 0週目から5週目までの割合 C. acne to S. epidermidis ベースラインの 0.93 から 5 週目の 1.55 まで大幅に増加しました (p < 0.001）。対照的に、 M. リストリクタ to M.グロボーサ ベースラインの 5.02 から 5 週目の 1.00 に減少しましたが、その差は統計的に有意ではありませんでした (p = 0.176) (図 3）。細菌比の 24 個の個別の変化 (C. acne to S. epidermidis）グリチルレチン酸シャンプーの5週間の介入後、22人の被験者で増加が見られました（図） 4A）。菌率の個体差（M. restricta to M. globosa) は、0 週目から 5 週目までの変動傾向を示しました (図 4B）。これら 24 人の被験者のうち、13 人の患者は 5 週間後に減少傾向を示しました。
SD の病因は複雑で、皮膚微生物叢、免疫系、頭皮の角質層の皮脂の不均衡の間の相互作用に起因すると仮説が立てられています。13 炎症性皮膚炎の慢性タイプであり、皮膚炎の増殖に関連することが知られています。 Malassezia species.1, 2 従来、頭皮の炎症を抑えるために局所ステロイドが使用されてきました。しかし、 Malassezia ステロイドでは種を抑制することはできません。さらに、病気の慢性的な性質と維持療法の必要性を考慮する必要があり、長期にわたる治療は避けられません。 SD は再発する性質があるため、ステロイドが長期の予防的使用には適切でないことは明らかです。
グリチルレチン酸単独では真菌に対して効果が弱いことがわかっていますが、我々の結果では大幅な減少が示されました。p < 0.001) の数 M. restricta and M. globosa グリチルレチン酸介入5週間後。 Saxena らによると、 M. restricta to M. globosa この比率はより健康な頭皮と関連していると考えられました。4 全体の比率は、 M. restricta to M. globosa 私たちの研究では、ベースラインの5.02から5週目の1.00に減少しましたが、結果は統計的に有意ではありませんでした。重要ではない変化は、24 の個々の真菌の比率間の変動傾向によるものである可能性があります (M. restricta to M. globosa）そしてこの研究のサンプルサイズは小さい。この比率の臨床的重要性と頭皮 SD 重症度評価への応用については、この概念を検証するためにさらなる研究が必要になる可能性があります。私たちの結果はまた、細菌の不均衡が真菌よりもフケの重症度に大きな影響を与えている可能性があることを示しました。より良い統計データを提供し、細菌、真菌、皮脂、頭皮 SD の水分補給の間の複雑な相互作用を明らかにするには、より大規模な対照研究が必要です。
結論として、私たちの研究は、6% グリチルレチン酸複合シャンプーによる頭皮 SD に対する顕著な治療反応を示しました。グリチルレチン酸の最も重要な役割は、その抗炎症作用と、一部の細菌および真菌株に対する実質的な抗菌活性です。この新しいレジメンの有効性は、治療後 2 週間という早い段階で DLQI と ASFS を臨床的に使用して客観的に実証されました。の阻害 S. epidermidis 同様に Malassezia 種は腸内細菌叢の異常を軽減し、微生物叢を回復しました。これらの有益な効果は、この製品に含まれる洗剤またはその他の補助成分に起因する可能性があるため、将来的にはさらにランダム化二重盲検プラセボ対照研究が必須となります。
この研究は、5 週間毎日シャンプーを使用するように設計されているため、実際の毎日のシナリオを表すものではありません。研究期間は短く、サンプルサイズも小さかった。この非無作為化非盲検研究には、比較のための対照群もありません。予算が限られていたため、4 つの微生物の分析は 34 名の被験者のうち 24 名のみで実施されました。製品の長期的な結果は評価できませんでした。最後に、有益な効果は、この製品に含まれる洗剤またはその他の補助成分に起因する可能性があります。将来的には、さらに無作為化二重盲検プラセボ対照研究が義務付けられる。
ACKNOWLEDGEMENTS
著者らは、頭皮検査プロセスを支援してくれた Wan-Hsuan Lee 氏と Zih-Han Hsu 氏、そして参加者の管理と募集について協力してくれた Pei-Yi Xu 氏に感謝したいと思います。
利益相反
この研究は台湾のMacroHi Co. Ltd.の支援を受けました。 CS Wang と HC Wang は、この研究における研究者としての役割に対して報酬を受け取りました。 HH Chen は原稿作成料を受け取りました。
著者の寄稿
HC Wang と CS Wang が研究を設計し、臨床評価を実施しました。 SC Hsieh と YT Hung は、配列決定実験とその後の微生物の分析を監督しました。王HC、王CS、チェンHHがデータを分析した。 HH Chen が原稿を書きました。 HC Wang、CS Wang、SC Hsieh が原稿をレビューしました。最終原稿は著者全員によって読まれ、承認されました。 倫理的承認
すべての手順は、国の法的要件と、2000 年と 2008 年に改訂された 1975 年のヘルシンキ宣言に記載された倫理原則に従って行われました。この研究は、En Chu Kong 病院倫理委員会 (IRB No. ECKIRB1090405) によって承認されました。すべての患者は研究前にインフォームドコンセント用紙に署名した。 REFERENCE
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